Etape 1: La stimulation ovarienne

Etape 1: La stimulation ovarienne
Pour stimuler les ovaires et la production de plusieurs ovocytes, deux médicaments sont utilisés.

1.Un analogue de la GnRH (Decapeptyl®) bloque la synthèse des hormones hypophysaires gonadotropes (FSH,LH) et induit un blocage du cycle naturel. L'administration journalière par voie sous-cutanée débute généralement 4 jours avant d'arrêter la prise de pilule et il se poursuit jusqu'au déclenchement de l'ovulation (env. 20-25 jours au total).

2.Une hormone folliculo-stimulante (FsH; Gonal-F®, Puregon®, Fostimon®, HMG Merional®, Menopor®) administrée quotidiennement sous forme d'injection sous-cutanée, induit la croissance des follicules ovariens (stimulation des ovaires). La croissance de ces follicules est suivie par des échographies (voir photo) et par des dosages sanguins d'hormones.

Echographie d'un ovaire montrant la présence de plusieurs follicules (les zones noires arrondies). Les plus gros d'entre eux ont 2 cm environ.
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# Enviado el martes 22 de julio de 2008 16:44

Etape 2: Le déclenchement de l'ovulation

Etape 2: Le déclenchement de l'ovulation
L'ovocyte n'est fécondable par le spermatozoïde que s'il a préalablement repris sa division méiotique et expulsé le premier globule polaire. On considère alors qu'il est mûr.

Dans un cycle naturel, la maturation de l'ovocyte et l'ovulation sont induites par le pic de LH, l'hormone lutéinisante. En cycle stimulé, l'administration de hCG (hormone de la grossesse) permet de mimer l'action de la LH. On parle alors de déclenchement de l'ovulation. Différentes hormones naturelles ou de synthèse, telles que la hCG urinaire, la hCG recombinante ou la LH recombinante, peuvent être utilisées à cette fin.

Le déclenchement de l'ovulation est généralement programmé 35 heures avant l'heure prévue de la ponction folliculaire.

Exemple d'ovocyte mature. On discerne le globule polaire à 15 heures indiquant la reprise de la méiose
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# Enviado el martes 22 de julio de 2008 16:45

Etape 3: Le prélèvement des ovocytes (OPU)

Etape 3: Le prélèvement des ovocytes (OPU)
La plupart des prélèvements d'ovocytes sont réalisés sous anesthésie générale en salle d'opération. Exceptionnellement, une anesthésie locale ou loco-régionale peut être proposée. Ce fait est discuté avec le médecin et avec l'anesthésiste avant l'intervention.

Les follicules sont ponctionnés, par voie vaginale, à l'aide d'une aiguille introduite dans le follicule à l'aide d'une sonde échographique. Les liquides ponctionnés sont recueillis dans des tubes étiquetés au nom de la patiente , puis acheminés au laboratoire. Les complexes cumulus-ovocytes (COC) sont recherchés (voir photo) à l'aide d'une loupe binoculaire, puis sont mis en culture dans un incubateur.

Trois complexes cumulus-ovocytes. Chaque COC a 2-3 mm de diamètre. Boîte de culture à 4 cupules
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# Enviado el martes 22 de julio de 2008 16:48

Etape 4: Le recueil et la préparation du sperme

Etape 4: Le recueil et la préparation du sperme
Le recueil du sperme est réalisé à proximité immédiate du laboratoire entre 09:00 et 10:30 le jour de la ponction. Une abstinence de 2-3 jours est recommandée, car cette durée permet d'obtenir un maximum de spermatozoïdes mobiles. Dans les cas où une éjaculation par masturbation est impossible, la récolte du sperme au cours d'un coït est possible, mais elle doit se faire dans un préservatif spécial mis à disposition par le laboratoire. Cette possibilité doit être discutée préalablement avec le médecin et le laboratoire.

Dans de très rares cas, lorsque le premier échantillon ne contient pas ou trop peu de spermatozoïdes, le recueil d'un deuxième prélèvement peut être nécessaire.

Congélation préalable du sperme.

Pour palier à des risques de "panne" fonctionnelle le jour de la ponction, nous recommandons au conjoint d'envisager la congélation d'un échantillon de sperme "de réserve" qui pourrait être utilisé en cas de "panne". Une fois informé, c'est au mari de décider si cette précaution lui semble nécessaire. Pour la congélation d'un échantillon de sperme le mari doit contacter le laboratoire et prendre rendez-vous. La même précaution d'abstinence de 2 – 3 jours s'applique.

Spermatozoïdes après lavage

Spermatozoïdes colorés au Papanicolaou

La longueur de la tête est de 4-5 µm, sa largeur de 1.50-1.75 µm, la longueur du flagelle est de 45 µm (variable d'un individu à l'autre).
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# Enviado el martes 22 de julio de 2008 16:50

Etapes 5: La mise en fécondation in vitro

Etapes 5: La mise en fécondation in vitro
En FIV classique, quelques heures après l'OPU, 50'000 spermatozoïdes sont mis en présence de chaque complexe cumulus-ovocyte. Cette mise en fécondation est réalisée dans une boîte de culture à 4 cupules (voir photo). Chaque boîte est identifiée avec le nom des patients et mise à incuber à 37°C en présence de 5% CO2, 5% O2 et 90% N2 dans un incubateur spécial.

Incubateur avec contrôle du CO2 et de l'O2
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# Enviado el martes 22 de julio de 2008 16:52